Evaluation de la sensibilité ex-vivo de Plasmodium falciparum et Plasmodium malariae de M5717 et sa combinaison avec la Pyronaridine sur le Plasmodium falciparum au Mali.

Abstract

Introduction : Le déclin de plusieurs molécules antipaludiques de première intention dans le traitement du paludisme à P. falciparum est dû à la multi-résistance en monothérapie. La combinaison thérapeutique à base d’artémisinine et ces dérives (les CTA) sont apparier dans la lutte contre le paludisme face aux échecs des médicaments antipaludiques en monothérapie. A présent l’émergence de la résistance parasitaire est entrain de gagne d’espace en présence CTA. Un besoin urgent de nouveaux médicaments antipaludiques aux spectres larges s’imposes. C’est dans cette lance, nous nous sommes intéresse au M5717 un inhibiteur d’élongation facteur 2 chez P. falciparum (PfeEF2). Le M5717 a été démontré très efficace en monothérapie sur des parasites souches de laboratoire en in-vitro et in-vivo sur des ras. Avec un meilleur profil, des parasites mutants résistants ont été sélections dans des parasites souches (in-vitro et in-vivo) au M5717. Pour contre carre la résistance parasitaire des souches de laboratoire le M5717 est associe en combinaison thérapeutique avec la Pyronaridine. C’est un inhibiteur de la formation d’hémozoïne dérive de la benzonaphtyridine, découvert en Chine dans les années 1970. Méthode : Nous avons mené une étude d’évaluation d’action expérimentale visant à évalue l’efficacité ex-vivo du M5717 sur les isolats cliniques de P. falciparum et P. malariae et la pharmacodynamie de sa combinaison avec la Pyronaridine sur l’isolats cliniques de P. falciparum. Cette étude a été menée de janvier 2021 au mai 2022 à Faladjé village rural situe dans le cercle de Kati région de Koulikoro à 80 Km de Bamako. Faladjé est une zone où le paludisme est hyper endémique et très saisonnier. La sélection des parasites d’isolats cliniques de P. falciparum résistants au M5717 par la pression médicamenteuse. Le logiciel GraphPad Prism version 9 a été utilisé pour l’analyse de régression non linéaire des données, ayant été préalablement normalisée par rapport aux témoins non traités lors de la détermination des courbes doses-réponses et le calcul de la concentration inhibitrice 50% (CI50). Un test d’isobologramme a été effectué à l’aide de Synergy Funder 2 une application web autonome avec des méthodes prédéfinies pour la détermination d’interaction médicamenteuse. La prédiction de Bliss est l’une, des méthodes prédéfinies pour démontrer une additivité indépendante. Résultats : Sur une ensemble de quatre différents isolats d’espèces P. falciparum et P. malariae nous avons réalisé un test de sensibilité ex-vivo au M5717 comparer à un contrôle le Dihydroarthemisinine (DHA). Nous avons observé une diminution de la population parasitaire avec une moyenne des concentrations inhibitrices à 50% du M5717 (CI50) = 1,46 nM et 3,16 nM et une moyenne (CI50) de DAH = 0,60 nM et 8,87 nM respectivement aux P. falciparum et P. malariae. Prise ensemble, ces résultats suggèrent que le M5717 est efficace sur les isolats de terrain de P. falciparum et P. malariae. Nous avons observé des parasites phénotypiquement résistants (recrudescence) au médicament candidat M5717 par le calcul des concentrations inhibitrices à 50% (CI50). Le séquençage ciblé du locus de eEF2 dans l’ADN des parasites recrudescents, nous a permis d’identifié des mutations d’une haute résistance au M5717 avec des changements nucléotidiques majoritairement de nucléotide (A en T) de l’allèle sauvage à l’allèle mutant. Nous observons par la prédiction de Bliss que plus le temps d’incubation augment l’effet d’additivité devient plus stable. Conclusion : Les résultats de cette étude montrent que le M5717 seul est efficace sur les isolats cliniques de Plasmodium falciparum et Plasmodium malariae de Kati Faladjé. Malgré l’efficacité de M5717 seul, des parasites mutants ont pu être généré avec une haute résistance à M5717. La combinaison entre M5717 et la Pyronaridine a un avantage pharmacodynamique additif par le modèle de prédiction de Bliss. Ces résultats pourront être améliorés en utilisant d’autre méthode, comme celle basé sur les outils de modélisation mathématique par la méthode de Checkerboard et un modèle comme General Pharmacodynamic Interaction (GPDI)plus adapté qui prend en compte les limites de ces méthodes et approches précédentes.